尊龙凯时研发的赭曲霉毒素检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书旨在为您提供清晰的操作指导，以便在实验室中高效、准确地检测赭曲霉毒素（Ochratoxins A，OTA）。

1. 原理及用途

赭曲霉毒素是一种由曲霉菌属和青霉菌属某些种类产生的二级代谢产物。其中，赭曲霉毒素A是分布最广、毒性最强的品种，严重影响人类及动植物健康。本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，能够有效检测谷物及饲料样本（如米面、花生和大豆）中的赭曲霉毒素。试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂，通过竞争反应分析样本中的赭曲霉毒素含量。

2. 技术指标

2.1 灵敏度与反应模式

试剂盒的灵敏度为1ppb（ng/ml），反应模式在37℃下进行，反应时间为30分钟～30分钟～15分钟。

2.2 检测下限

谷物的检测下限为5ppb，饲料的检测下限为10ppb。

2.3 交叉反应率

赭曲霉毒素A的交叉反应率为100%。

2.4 样本回收率

对于谷物及配合饲料的样本回收率为85%±15%。

3. 试剂盒组成

• 酶标板（96孔）
• 标准品（黑盖）各1ml: 0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
• 酶标记物（红盖）11ml
• 抗体工作液（蓝盖）55ml
• 底物液A（白盖）6ml
• 底物液B（黑盖）6ml
• 终止液（黄盖）6ml
• 20×浓缩洗涤液（白盖）40ml
• 说明书1份
• 盖板膜1张
• 自封袋1个

4. 设备与试剂要求

4.1 仪器

所需仪器包括酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管及天平（感量0.01g）。

4.2 微量移液器

推荐使用单道20µl-200µl、100µl-1000µl及多道300µl的微量移液器。

5. 样本前处理

5.1 样本处理前须知

实验器具必须洁净，并使用一次性吸头以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液

配液1：70%甲醇（V甲醇: V水=7:3）。配液2：0.1M碳酸氢钠溶液（42g碳酸氢钠与去离子水混匀，定容至500ml）。配液3：工作洗涤液（工作洗涤液20倍稀释）。

5.3 样本前处理步骤

针对食品类谷物和大豆的处理方法为：取4g粉碎样品，加10ml 70%甲醇，振荡5分钟，离心10分钟；取1ml上清，加1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡；取50μl进行分析，样本稀释倍数为5，检测下限为5ppb。

对于饲料处理方法：取2g粉碎样品，加10ml 70%甲醇，振荡5分钟，离心10分钟；取1ml上清，加1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡；取50μl进行分析，样本稀释倍数为10，检测下限为10ppb。

6. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃状态转至室温平衡30分钟，确保洗涤液完全溶解。取出所需数量的微孔板，未使用的部分需储存于2-8℃的环境中。

6.1 编号

按序编号样本和标准品，每个样本和标准品需做2孔平行实验，并记录位置。

6.2 加样反应

向每个微孔中加入标准品或样本50µl，加入抗体工作液50µl，轻轻振荡混匀，37℃避光反应30分钟。

6.3 洗涤

小心揭开盖板膜，弃去孔内液体，每孔加入350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次用吸水纸拍干。

6.4 加酶反应

向每孔加入酶标记物100µl，37℃避光反应30分钟。

6.5 显色

依次加入底物液A和底物液B各50µl，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟。

6.6 终止反应

加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，以终止反应。

6.7 测量吸光值

使用酶标仪在450nm处测定每孔的吸光度值（建议双波长测量450/630nm），测定应在终止反应后10分钟内完成。

7. 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

样本或标准液的百分吸光率等于其平均吸光度值（双孔）除以0ppb标准液的吸光度值，乘以100%。

7.2 标准曲线的绘制与计算

以标准液百分吸光率为纵坐标，标准液浓度对数为横坐标，绘制半对数曲线。根据样本的百分吸光率从标准曲线上获取对应浓度，乘以稀释倍数即为实际浓度。

8. 注意事项

请注意：室温低于25℃或试剂及样本未回到室温将导致标准OD值偏低；洗板过程孔内干燥会影响结果；混合和洗涤的一致性对再现性至关重要；孵育过程中需盖住微孔板以避免光线影响；请勿使用过期试剂盒或不同批号的试剂。

9. 贮藏及保存期

尊龙凯时的试剂盒需储存于2-8℃，避免冷冻，产品有效期为1年，生产日期见包装盒。