小鼠肺微血管内皮细胞构成了一种半选择性屏障，这种屏障在肺部气体交换以及调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动中发挥着重要作用。它们还具备一定的代谢功能，能够执行与呼吸无关的生理功能。在肺损伤的情况下，肺微血管内皮细胞成为活性氧物质的重要靶细胞之一。在肺炎的发展过程中，神经体液介质和氧化剂干扰内皮细胞的正常功能，导致细胞间隙的渗透性增加，从而使得蛋白质从血液进入间质。这一过程的结果是低氧血症的出现，并可能引发成人呼吸窘迫综合征及非心源性肺水肿。

我们获取的小鼠肺微血管内皮细胞来自实验动物的正常肺组织，这些细胞呈上皮样且多角形，通过贴壁培养方式构建细胞模型。经CD31免疫荧光染色的鉴定显示，细胞阳性率超过90%，且未检测到HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母及真菌。

实验所需仪器设备及试剂

1. 仪器

• 生物安全柜 BSC-1500ⅡA2-X
• 细胞培养箱 BC-J160S
• 荧光倒置显微镜 DS-Ri2
• 高速冷冻离心机 MultifugeX1R
• 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A
• 电热恒温震荡水槽 DK-2B

2. 试剂耗材

• T25细胞培养瓶 430639
• 血球计数板 Neubauer improved
• 24孔板专用细胞爬片 YA0350
• 细胞培养孔板 WHB-24
• 胎牛血清 1414426
• 内皮细胞培养基 Primed-icell-0020
• 25%胰蛋白酶（含0.02% EDTA）1734858

小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1. 将5-10天龄的小鼠浸泡在75%乙醇中，然后移入生物安全柜中处理。
2. 从胸腔解剖小鼠，取出双肺并置于预冷的PBS中，尽可能去除结缔组织。
3. 剪取肺边缘部分，剪碎后将组织块移入T25培养瓶中，并倒置于细胞培养箱中。
4. 2小时后，向培养瓶中注入2mL内皮培养基，小心将瓶子正置，确保组织块不漂浮。
5. 每3天更换培养基2mL，当细胞从组织块中爬出后，改为每2天更换一次。待细胞融合达到60-70%时，去除组织块，并重新将肺微血管内皮细胞铺瓶。

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